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2022-09-23 08:35:41 By : Mr. Lincoln Wang

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Juli 2022 veröffentlichtDieser Artikel wurde aktualisiert5-Fluorouracil (5-FU) ist eines der häufigsten chemotherapeutischen Mittel, das bei der Behandlung von soliden Tumoren verwendet wird, und die 5-FU-induzierte Kardiotoxizität ist die zweite Ursache der durch Chemotherapeutika induzierten Kardiotoxizität.Propolis (Pro) hat eine starke entzündungshemmende Wirkung.Seine kardioprotektive Eigenschaft gegen Doxorubicin-induzierte Kardiotoxizität wurde zuvor nachgewiesen.Die aktuelle Studie zielte darauf ab, die Wirkung von Pro auf die 5-FU-induzierte Kardiotoxizität bei Ratten zu bewerten.Vierundzwanzig männliche Wistar-Ratten wurden in vier Gruppen eingeteilt: Kontrolle, 5-FU, 5-FU + Pro 250 mg/kg und 5-FU + Colchicin (CLC) 5 mg/kg.Verschiedene hämatologische, serologische, biochemische, histopathologische und molekulare Assays wurden durchgeführt, um das Ziel der Studie zu bewerten.Darüber hinaus wurde auch eine Rattenmyokardzelllinie (H9C2(2–1)) verwendet, um diese Schutzwirkung in-vitro zu bewerten.5-FU führte zu einer signifikanten Kardiotoxizität, die durch einen Anstieg der Malondialdehyd (MDA)-Spiegel, Cyclooxygenase-2 (COX-2) und Tumornekrosefaktor-α (TNF-α)-Expression, Herzenzymspiegel und histopathologische Degenerationen dargestellt wird.Die 5-FU-Behandlung verringerte auch das Körpergewicht, die gesamte Antioxidanskapazität (TAC), die Katalase (CAT)-Spiegel, die Anzahl der Blutzellen und die Hämoglobin (Hb)-Spiegel.Darüber hinaus störte 5-FU die EKG-Parameter, einschließlich einer erhöhten Erhebung im ST-Segment und einer erhöhten QRS-Komplex- und QTc-Dauer.Die Behandlung mit Pro reduzierte oxidativen Stress, Herzenzyme, histopathologische Degenerationen und COX-2-Expression im Herzgewebe, linderte EKG-Störungen und erhöhte die Anzahl der Blutzellen und TAC-Spiegel.Darüber hinaus wurde der 5-FU-induzierte Körpergewichtsverlust nach der Behandlung mit Pro verbessert.Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Behandlung mit Pro die durch 5-FU induzierte Kardiotoxizität bei Ratten signifikant verbesserte.Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVDs) sind weltweit eine bedeutende Todesursache und belasten die Länder erheblich.Im Jahr 2015 waren weltweit etwa 18 Millionen Todesfälle auf kardiovaskuläre Erkrankungen zurückzuführen, von denen die Hälfte durch ischämische Herzkrankheit (IHD)1 verursacht wurde.Arteriosklerose ist nachweislich einer der wesentlichen Risikofaktoren für koronare Herzkrankheiten (KHK), und Entzündungen wiederum spielen nachweislich eine entscheidende Rolle bei der Manifestation von Arteriosklerose2.Daher können mehrere Chemotherapeutika, indem sie eine Entzündung und eine anschließende Entzündungsreaktion im Körper hervorrufen, eine schwere Kardiotoxizität, einschließlich einer myokardialen Ischämie, verursachen3.Angiogene Inhibitoren wie Bevacizumab4, Sunitinib und Sorafenib5 sowie direkte ABL-Inhibitoren wie Imatinib6 und Dasatinib7 können eine Myokardischämie verursachen.Andere wichtige und weit verbreitete Chemotherapeutika mit kardiotoxischen Nebenwirkungen sind Doxorubicin8 und 5-FU9.5-Fluorouracil (5-FU), ein Mitglied der Klasse der Fluorpyrimidin-Chemotherapeutika, kann die DNA-Replikation stoppen, indem es die Bildung von Thymidin durch mehrere intrazelluläre Mechanismen hemmt, von denen die Hemmung des Enzyms Thymidylat-Synthase die wesentliche Rolle zu spielen scheint10.Seit seiner Einführung im Jahr 1957 durch Heidelberger et al.11 ist es ein wesentlicher Bestandteil der Chemotherapie bei mehreren soliden Tumoren, einschließlich gastrointestinaler, Brust-, Kopf-Hals- und Pankreas-Neoplasmen12.Es kann viele Nebenwirkungen verursachen, einschließlich schwerer Kardiotoxizität, die sich oft als myokardiale Ischämie manifestieren, aber auch als Herzrhythmusstörungen, Hyper- und Hypotonie, linksventrikuläre Dysfunktion, Herzstillstand und sogar Tod auftreten können13.Die Prävalenz von 5-FU-induzierten Herzkomplikationen kann zwischen 0–20 % variieren, hauptsächlich abhängig von der Dosierung, Komorbiditätsfaktoren und dem Schema des Chemotherapieschemas9.Die definitiven Mechanismen der 5-FU-induzierten Kardiotoxizität sind nicht klar verstanden.Einige Studien deuten jedoch darauf hin, dass Koronararterienthrombose, Arteriitis oder Vasospasmus für die Nebenwirkungen verantwortlich sein können13.Es wurde auch berichtet, dass andere Mechanismen für die Kardiotoxizität dieses Medikaments verantwortlich sind, einschließlich direkter myokardialer Toxizität14, Aktivierung von Autoimmunreaktionen15 und direkter koronarer endothelialer Intimatoxizität16.Mehrere bekannte Polyphenole haben nachgewiesene kardioprotektive Eigenschaften, darunter Resveratrol17, Quercetin18, Katechine19, Curcumin20, Baicalein21, Genistein22 und Apigenin23.Auch Propolis ist ein weiterer Wirkstoff mit nachgewiesener kardioprotektiver Wirkung24.Propolis, auch Bienenleim genannt, ist ein lipophiler Harzstoff, den Honigbienen beim Bau ihrer Bienenstöcke produzieren.Kurz gesagt, Bienen sammeln verschiedene botanische Materialien wie Schleim, Gummi, Harze und Gitter.Wenn sich diese Materialien mit dem im Bienenspeichel abgesonderten Enzym β-Glykosidase vermischen, werden sie teilweise verdaut, und wenn sie Bienenwachs zugesetzt werden, bilden sie schließlich rohes Propolis, das in der Natur als Propolis bekannt ist25.Die Beschaffenheit dieses Endprodukts ändert sich bei unterschiedlichen Temperaturen, so dass es bei Abkühlung hart und wachsartig wird, bei Wärme jedoch weich und klebrig.Die Bestandteile von Propolis und folglich seine biologischen Aktivitäten können je nach Herstellungsort und Pflanzenvariabilität im Bienenstock stark variieren25.Es kann hauptsächlich aus Phenolen wie Flavonoiden, aromatischen Säuren und ihren Estern in gemäßigten Regionen bis hin zu prenylierten p-Cumarinsäurederivaten in brasilianischer Propolis hergestellt werden25.Einige seiner nachgewiesenen biologischen Aktivitäten umfassen: entzündungshemmend, antioxidativ, antiulzerogen, hepatoprotektiv26, Antitumor27, Immunstimulation/Modulation28, antibakteriell29, antiviral30, antimykotisch31 und antiparasitär32.Seine kardioprotektive Eigenschaft gegen durch Doxorubicin-24, hypothermic-33, N \(\omega \) -nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)-induzierte Kardiotoxizität34 wurde ebenfalls bereits untersucht.Diese Studie untersucht die verbessernden Wirkungen der Propolis-Verabreichung bei 5-Fluorouracil-induzierter Kardiotoxizität in-vitro und in-vivo.Alle Chemikalien waren von höchster Qualität (analytische Qualität).N-Hexan (HPLC-Qualität), Ethanol (Reinheit > 98 %), N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid (BSTFA) mit 1 % Trimethylsilylchlorid (TMCS), Polyethylenglykol (Mn: 6000) und Rizinusöl wurden gekauft von Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland.Dimethylsulfoxid (DMSO, GC-Qualität, Reinheit > 99,99 %) wurde von Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA bezogen.5-Fluorouracil 1000 mg Fläschchen wurde von Iran Darou, Teheran, Iran gekauft.In allen Experimenten wurde ultrareines Milli-Q-Wasser (18,2 MW) verwendet.Das rohe Propolis der Bienenstöcke von Apis mellifera wurde im Frühjahr 2020 in den Alborz-Bergen in Polur, Teheran, Iran, gesammelt.Alle Propolisproben wurden bis zur weiteren Extraktherstellung bei 4°C vor Licht geschützt aufbewahrt.Die Extraktionsmethode basierte auf einer früheren Studie35.Die Propolisproben wurden mit Mörser und Pistill pulverisiert, und die pulverisierten Proben wurden mit n-Hexan in einem Verhältnis von 3:100 (w/v; 3 g rohes Propolis wurden mit 100 ml n-Hexan gemischt) gemischt und geschüttelt (120 U/min) bei 30 °C für 4 Tage, um das Bienenwachs zu entfernen.Die Mischung wurde durch Whatman 42-Filterpapier (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) filtriert, und die verbleibenden festen Teile der Propolisproben auf dem Filterpapier wurden bei Raumtemperatur getrocknet.Nach dem Entfernen von Bienenwachs wurden die festen Rückstände mit zwei verschiedenen Lösungsmitteln, 70 % Ethanol (EtOH) und DCM, in einem Verhältnis von 3:10 (w/v) extrahiert.Nach der Hexanextraktion wurde eine Probe von 3 g in 10 ml 70 % EtOH gelöst, und die Extraktion wurde im Dunkeln auf einem Schüttler (120 U/min) bei 30 °C für 3 Tage durchgeführt.Der 70%ige EtOH-Extrakt von Propolis wurde durch Whatman 42-Filterpapier unter Vakuum filtriert.Das organische Lösungsmittel des filtrierten Extrakts wurde unter reduziertem Druck bei 50°C durch einen Rotationsverdampfer entfernt.Die endgültigen Extrakte wurden in einem verschlossenen Behälter in einem Kühlschrank bei 4 °C gelagert und bis zur Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS)-Analyse vor Licht geschützt36.Fünf Gramm des endgültigen ethanolischen Propolis-Extrakts wurden in 250 &mgr;l Pyridin (wasserfrei, Reinheit = 99,8 %) und 500 &mgr;l BSTFA, einschließlich 1 % TMCS, gelöst und bei 100°C für eine halbe Stunde geschüttelt.Die detaillierten Informationen zum botanischen Ursprung dieses Extrakts und zu den phytochemischen Bestandteilen werden an anderer Stelle erörtert37.Dennoch wurde die chemische Zusammensetzung des ethanolischen Propolis-Extrakts erneut mit einem Gaschromatographie-Massenspektrometriegerät (5977B GC/MSD, Agilent, Santa Clara, CA, USA) bewertet.Die experimentellen Bedingungen der DB-5 ms-Kapillarsäule waren wie folgt: Länge = 30 m, Innendurchmesser = 0,25 mm, Filmdicke = 0,25 µm, Gasträger: Helium mit einer Reinheit ≥ 99,9995 % (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA), Gasflussrate: 1 ml/min.Die GC-MS-Analyse basierte auf einer früheren Studie37.Kurz gesagt, 1 µL der im letzten Schritt hergestellten Endlösung wurde mit einem Autosampler in einem Split-Verhältnis von 10:1 in das Gerät injiziert.Die Temperatur des Injektors wurde auf 250°C eingestellt.Die Ofentemperatur wurde so programmiert, dass sie bei 50 °C startete (Lagerungszeit 1 min), dann mit einer Geschwindigkeit von 8 °C/min auf 120 °C (Lagerungszeit 1 min) erhöht wurde.Schließlich sollte die Temperatur mit einer Rate von 6 °C/min in etwa 15 min auf 250 °C erhöht werden.Die Gesamtlaufzeit des Geräts betrug 47 min, mit einer Lösungsmittelverzögerung von 0–3 min.Die Namen, das Molekulargewicht und die Struktur der Propolis-Probenkomponenten wurden unter Verwendung der Datenbank des National Institute of Standards and Technology (NIST 11 Variant) identifiziert.Rattenmyokard (H9C2(2–1))-Zelllinie wurde von der National Cell Bank of Iran (NCBI, Pasteur Institute, Teheran, Iran) erhalten.Diese Zelllinien wurden in Medium des Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640) kultiviert, das Glukose 2 g/l, L-Arginin und L-Glutamin 200 bzw. 300 mg/l enthielt, ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) und 1 % Pen/Streptokokken bestehend aus Penicillin G 100 U/ml und Streptomycin 100 µg/ml.Die Zelllinien wurden als Monoschichten in 25 cm2 Zellkulturflaschen bei 37 °C in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % CO2 gezüchtet.Die Zytotoxizität von ethanolischem Propolis-Extrakt wurde mit dem Cell Viability (MTT)-Assay bewertet.Das in dieser Studie verwendete Verfahren für den MTT-Assay wurde an anderer Stelle beschrieben38.Kurz gesagt wurde die Zelllinie mit 5-FU 75 &mgr;M, CLC 50 &mgr;g/ml und Pro 50, 100 und 200 &mgr;g/ml behandelt, wobei jede Konzentration dreifach untersucht wurde.Die behandelten Platten wurden dann bei 37 °C in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % CO 2 inkubiert und nach 48 h wurde ein MTT-Assay durchgeführt.Dann wurde eine Konzentration von 5 mg/ml MTT-Farbstoff (Alfa Aesar, Thermo Fisher (Kandel) GmbH, Kandel, Deutschland) mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) gemischt, die Mischung wurde durch Whatman Grad 42 aschefreies quantitatives Filterpapier ( Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) und 50 &mgr;l der filtrierten Lösung wurden zu jeder beimpften Vertiefung hinzugefügt und bei 37°C für 4 h inkubiert.Nach dem Entfernen des Überstands wurden 150 &mgr;l DMSO zu jeder Vertiefung gegeben, und die optische Dichte (OD) wurde mit einem Absorptions-Mikroplatten-Lesegerät (ELx808, BioTek, Winooski, VT, USA) bei 570 nm gemessen.24 männliche Wistar-Ratten (6–8 Wochen, 180 ± 20 g) wurden von der Labortiereinrichtung der Babol University of Medical Sciences bezogen.Alle Tiere wurden in 12-Stunden-Hell-/12-Stunden-Dunkel-Zyklen gehalten und in einer kontrollierten Umgebung mit festgelegten Temperaturen (22–24 °C) und Feuchtigkeit (50 ± 5 %) gehalten.Die Tiere wurden in Käfigen mit LSB-Holzspaneinstreu gehalten und hatten während der gesamten Versuchsdauer freien Zugang zu Futter und Leitungswasser.Alle Studienverfahren wurden nach Genehmigung durch das Ethikgremium des National Institute for Medical Research Development (NIMAD) durchgeführt (Code: IR.NIMAD.REC.1399.255).Studienratten wurden nach dem Zufallsprinzip wie folgt in vier Gruppen eingeteilt:Die negative Kontrollgruppe erhielt 14 Tage lang 200 &mgr;l Rizinusöl (Kontrolle).Die 5-Fluorouracil-Gruppe erhielt eine intraperitoneale Bolusdosis von 125 mg/kg 5-Fluorouracil (5-FU).Die experimentelle Gruppe erhielt eine Bolusdosis von 125 mg/kg von 5-Fluorouracil intraperitoneal plus 250 mg/kg/d ethanolischen Propolisextrakt durch orale Sondenernährung für 14 Tage (5-FU + Pro).Die positive Kontrollgruppe erhielt eine Bolusdosis von 125 mg/kg von 5-Fluorouracil intraperitoneal plus Colchicin 5 mg/kg/d durch orale Sondenernährung für 14 Tage (5-FU + CLC).Eine Elektrokardiographie (EKG) wurde für 15 Minuten am Tag vor dem Einschläfern der Studientiere durchgeführt.Zu diesem Zweck wurden die Ratten in jeder Gruppe mit Ketamin/Xylazin anästhesiert, subkutane periphere Gliedmaßenelektroden wurden in die Gliedmaßen eingeführt, um die Standardableitung II des Elektrokardiographen und EKG-Parameter wie ST-Streckenhebung und QRS- und QTc-Dauer aufzuzeichnen , wurden mit einem EKG-Gerät (eLab, Sciencebeam, Teheran, Iran) gemessen39.Die Ratten wurden am fünfzehnten Tag gewogen und mit Ketamin/Xylazin anästhesiert.Dann wurden 5-ml-Blutproben sofort direkt aus dem Herzen entnommen und zur weiteren Serumtrennung durch 15-minütige Zentrifugation bei 1.500 g in 5-ml-Mikroröhrchen gegossen.Anschließend wurden die Tiere durch die Enthauptungsmethode eingeschläfert und ihr Herz entnommen.Ungefähr 20–30 mg des entnommenen Herzgewebes wurden sofort in 1,5 ml RNase- und DNase-freie Mikroröhrchen, einschließlich 200 &mgr;l späterer RNA-Lösung (Yekta Tajhiz Azma, Teheran, Iran) überführt.Nach Inkubation über Nacht bei 4 °C wurden diese Mikroröhrchen bis zur RNA-Extraktion auf – 80 °C überführt.Die restlichen Gewebeproben wurden jedoch in ein formalinhaltiges Röhrchen gegeben und dann zusammen mit den Serumproben zur weiteren Analyse bei −20 °C aufbewahrt.Die Anzahl der weißen Blutkörperchen (WBC, × 103/µL) und der roten Blutkörperchen (RBC, × 106/µL), Hämoglobin (Hb, g/dL) und Blutplättchen (PLT, × 103/µL) wurden mit an quantifiziert automatisierter Zähler (H9000, Xuzhou forward medical instrument Co. Ltd., Xuzhou, China).Um die enzymatische Aktivität von Lebergewebe zu bestimmen, wurden die Niveaus von Leberfunktionstests (LFT), dh Aspartat-Aminotransferase (AST) und Alanin-Aminotransferase (ALT), durch kommerzielle ELISA-Kits (Pars Azmun, Karaj, Iran) bewertet.Dann wurde das De Ritis (AST/ALT)-Verhältnis für die Studienproben berechnet.Die Aktivitäten von Laktatdehydrogenase (LDH, IU/L) und Kreatininkinase-MB (CK-MB, IU/L) wurden in Serumproben mit handelsüblichen ELISA-Kits (Pars Azmun, Karaj, Iran) gemessen.Ein kommerzieller ELISA-Kit (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) (Teb Pazhouhan Razi, Teheran, Iran) wurde verwendet, um die gesamte antioxidative Kapazität (TAC) der Serumproben der Ratten zu bestimmen.Milleret al.(1993) veröffentlichten eine detaillierte Beschreibung der Technik40.Schließlich maß ein Absorptionsmikroplattenlesegerät (ELx808, BioTek, Winooski, VT, Vereinigte Staaten) die OD der Proben bei 420 nm.Der Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizient dieses ELISA-Kits betrug 5,7 % bzw. 3,7 %, und sein Nachweisbereich betrug 45–420 μM.Katalase (CAT) ist ein allgegenwärtiges antioxidatives Enzym, das in den Peroxisomen aller Zellen vorhanden ist und die Zellen vor Schäden durch oxidativen Stress schützt, indem es die Zersetzung von Wasserstoffperoxid (H2O2) zu Wasser und Sauerstoff katalysiert.Zur Bestimmung der CAT-Spiegel wurde ein kommerzieller ELISA-Kit verwendet (Teb Pazhouhan Razi, Teheran, Iran), in dem die CAT-Aktivität durch die Reaktion des in der Probe vorhandenen CAT mit Methanol in Gegenwart einer optimalen Konzentration von H2O2 zur Bildung von Formaldehyd bestimmt wurde.Nach Zugabe eines Chromogens, das Aldehyde violett färbt, wird die Formaldehydbildung durch kolorimetrische Analyse bestimmt.Schließlich maß ein Absorptionsmikroplattenlesegerät (ELx808, BioTek, Winooski, VT, USA) die OD der Proben bei 540 nm.Der Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizient dieses Kits betrug 4,1 % bzw. 9,9 %.Der Malondialdehyd (MDA)-Assay wurde verwendet, um die Lipidperoxidationsniveaus der Serumproben zu bewerten.MDA ist ein Endprodukt des durch freie Radikale initiierten oxidativen Abbaus der mehrfach ungesättigten Fettsäuren.Damit ist es ein häufig gemessener Biomarker für oxidativen Stress.Ein kommerzieller ELISA-Kit wurde verwendet, um die MDA-Spiegel (Teb Pazhouhan Razi, Teheran, Iran) unter Verwendung einer spektrophotometrischen Methode zu bestimmen, die auf der Reaktion zwischen MDA und Thiobarbitursäure (TBA) basiert und ein MDA-TBA-Addukt erzeugt, das durch kolorimetrische Analyse quantifiziert werden kann .Schließlich maß ein Absorptionsmikroplattenlesegerät (ELx808, BioTek, Winooski, VT, USA) die OD der Proben bei 540 nm.Der Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizient dieses ELISA-Kits betrug 6,7 % bzw. 7,2 %, und sein Nachweisbereich lag bei 0–50 μM.Das Herz jeder Ratte wurde geerntet und separat gewogen.Diese Gewebeproben wurden in 10%iger Formalinlösung fixiert und unter Verwendung eines Gewebeverarbeitungsgeräts (Entwässern, Klären und Färben) verarbeitet, in Paraffinblöcke eingebettet, in 5 um dicke Schichten geschnitten und mit Hämatoxylin und Eosin (H&E) gefärbt.Auf jede Scheibe wurden durchschnittlich vier Schnitte gelegt.Dazu wurden ca. 390 Schnitte mit digitaler Lichtmikroskopie ausgewertet.Hyperämie, Nekrose und Hyalinisierung wurden in jedem Abschnitt bewertet.Ein erfahrener Anwender (Seyed Mohammad Hosseini) führte alle morphologischen Analysen mit einem Medicus pro-Myko-Mikroskop (Helmut Hund GmbH, Wetzlar, Deutschland) unter 40-, 100- und 400-facher Vergrößerung durch.Ein kommerzieller Gesamt-RNA-Extraktionskit (Pars Tous Biotechnology, Mashhad, Iran) extrahierte die Gesamt-RNA der zuvor beschriebenen 20–30 mg geernteten Herzgewebes.Die extrahierte RNA jeder Probe wurde unter Verwendung eines NanoDrop-Spektrophotometers (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) gemessen.Anschließend wurden alle RNA-Proben bis zur weiteren Analyse auf – 80 °C überführt.Für die cDNA-Synthese wurde ein kommerzielles cDNA-Synthesekit (Pars Tous Biotechnology, Mashhad, Iran) verwendet, in dem die folgende Mischung enthalten war: 250 ng der zuvor erwähnten extrahierten RNA-Proben, 5 &mgr;l des 2 × Enzympuffers und 1 &mgr;l des Enzyms Reverse Transkriptase.Die resultierende Mischung erreichte dann unter Verwendung von mit Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltem Wasser ein Volumen von 10 &mgr;l.Anschließend wurde die Mischung mit einem PCR-Thermocycler (FlexCycler2, Analytik Jena AG, Jena, Deutschland) wie folgt inkubiert: Bei Raumtemperatur für 10 min für das Random-Hexamer-Primer-Annealing, bei 47 °C für 60 min für die Reverse-Transkriptase-Reaktion und schließlich bei 85 °C für 5 min zum Beenden der Reaktion.cDNA-Proben wurden in Duplikaten durch PCR in RealQ Plus Master Mix Green (Ampliqon, Odense C, Dänemark) unter Verwendung eines 7300 Real-Time PCR-Systems (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) amplifiziert.OLIGO Primer Analysis Software 7 (DBA Oligo, Inc., Colorado Springs, CO, USA) wurde verwendet, um spezifische Primer zu entwerfen, die in Tabelle 1 zusammengefasst sind Mastermix, 0,25 µl jedes Primers, 2,25 µl RNase-freies dH2O und 1 µl cDNA-Matrizen.Die Amplifikationsreaktionszyklen wurden wie folgt durchgeführt: Anfängliche Denaturierung bei 95 °C für 15 min, dann 40 Zyklen bei 95 °C für 15 s, Annealing-Temperatur für 30 s, die für jeden Primer unterschiedlich war, wie in Tabelle 1 dargestellt, und Verlängerung bei 72 °C für 30 s.Am Ende der Amplifikationszyklen wurde die Temperatur der Proben zur Berechnung der Schmelzkurve mit einer stetigen Rate von 0,2 °C/min von 60 °C auf 95 °C erhöht.Schmelzkurvenanalysen und Negativkontrollen wurden in jeden Assay eingebettet, um sicherzustellen, dass die Reaktionskontamination keine CR-Produkte produzierte41.Die relativen Expressionsverhältnisse (R) der Zielgene wurden unter Verwendung eines von Pfaffl et al.42 vorgeschlagenen Modells gemessen, in dem die Effizienz der Referenz- und Zielgene gemäß einer relativen Standardkurve berechnet wurde, die aus verschiedenen Verdünnungen (d , 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 und 1:32) von cDNAs aus hochwertigen Proben mit guter Zielgenexpression.In dieser Studie wurde Glyceraldehyd-3-Phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) als Referenzgen zur Normalisierung von Proben verwendet.Alle Daten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt.Einweg-ANOVA, gefolgt von Post-hoc-Tukey-Tests, wurden verwendet, um die Unterschiede zwischen den Studiengruppen zu bewerten.Darüber hinaus wurden für nichtparametrische Analysen, wie z. B. histopathologische Auswertungen, die Kruskal-Wallis- und Mann-Whitney-U-Tests verwendet.Ein Wahrscheinlichkeitsniveau (p-Wert) von < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.Dennoch werden gegebenenfalls andere p-Werte angegeben, dh p < 0,01, < 0,001 und < 0,0001.Alle statistischen Analysen wurden mit der Software SPSS v. 26 (IBM Inc., Chicago, IL, USA) durchgeführt.Das in der folgenden Untersuchung verwendete Tier wurde streng nach dem Animal (Scientific Procedures) Act 1986 gehandhabt. Darüber hinaus wurden alle Studienverfahren nach Genehmigung durch das Ethikkomitee des National Institute for Medical Research Development (NIMAD) durchgeführt (Code: IR.NIMAD .REC.1399.255).Darüber hinaus wird diese Studie gemäß den ARRIVE-Richtlinien (https://arriveguidelines.org/) berichtet.In der GC-MS-Studie stand der erste Peak bei 32,066 s im Zusammenhang mit dem Pinostrobin-Chalcon (15,099 % der Gesamtmenge).Der zweite, dritte und vierte Peak waren mit Galangin (55,509 % der Gesamtmenge, 33,256 s), Tectochrysin (13,216 % der Gesamtmenge, 34,973 s) bzw. Naringenin (16,177 % der Gesamtmenge, 36,552 s) verbunden (Abb. 1).Die GC-MS-Analyse des ethanolischen Propolis-Extrakts.Probenpeaks wurden als Pinostrobin-Chalcon (32,066 s, 15,099 % der Gesamtmenge), Galangin (33,256 s, 55,509 % der Gesamtmenge), Tectochrysin (34,973 s, 13,216 % der Gesamtmenge) und Naringenin (36,552 s, 16,177 % der Gesamtmenge) nachgewiesen. .In den H9C2(2–1)-Zelllinien wurden die höchsten und niedrigsten MTT-Spiegel in der Kontroll- bzw. 5-FU 75 + CLC 50 -Gruppe nachgewiesen.Die Niveaus des MTT waren in DMSO- und 5-FU 75 + Pro 50-Gruppen fast gleich.Die Zellüberlebensfähigkeit in den 5-FU 75 + CLC 50-, 5-FU 75 + Pro 100- und 5-FU 75 + Pro 200-Gruppen war signifikant niedriger als in der 5-FU 75 + Pro 50-Gruppe (p < 0,0001).Auch war das MTT-Niveau in der Kontrollgruppe signifikant höher als in der 5-FU 75 + Pro 50-Gruppe (p < 0,0001).Darüber hinaus wurde beobachtet, dass zunehmende Pro-Konzentrationen die Überlebensfähigkeit der Zellen dosisabhängig verringern würden, vermutlich aufgrund einer synergistischen toxischen Wirkung mit 5-FU (Abb. 2).Wirkung verschiedener Dosen von Propolis auf die Lebensfähigkeit der Zelllinie des Rattenmyokards (H9C2(2–1)).Alle Werte sind als Mittelwert ± SD ausgedrückt.**** zeigt p < 0,0001 an.Die höchsten und niedrigsten Werte des relativen Herzgewichts wurden in der 5-FU + Pro- bzw. Kontrollgruppe beobachtet.Das relative Herzgewicht der Studienratten war in der 5-FU + Pro-Gruppe signifikant höher als in der 5-FU- und der Kontrollgruppe (p < 0,001).Darüber hinaus war das relative Herzgewicht in der 5-FU- und der Kontrollgruppe niedriger als in der 5-FU + CLC-Gruppe, aber diese Unterschiede waren unbedeutend.Das relative Herzgewicht der Ratten in der 5-FU + Pro-Gruppe war höher als in der 5-FU + CLC-Gruppe, aber dieser Unterschied war ebenfalls nicht signifikant ( 3 ).Wirkung der Verabreichung von 5-Fluoruracil und Propolis auf das relative Herzgewicht von Ratten.Die Werte werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.*** geben p < 0,001 an.Die höchsten und niedrigsten QRS-Intervalle in den EKG-Untersuchungen wurden in der 5-FU- bzw. 5-FU + Pro-Gruppe gemessen (Tabelle 2).Das QRS-Intervall der 5-FU- und 5-FU + Pro-Gruppen war signifikant höher als das der Kontrollgruppe (p < 0,0001).Auch das QRS-Intervall der 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen war signifikant niedriger als das der 5-FU-Gruppe (p < 0,0001).Darüber hinaus hatte die 5-FU + Pro-Gruppe ein kürzeres QRS-Intervall als die 5-FU + CLC-Gruppe (p < 0,0001) (Abb. 4).EKG-Bilder von Studienratten.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.Bei den EKG-Untersuchungen wurde die höchste und niedrigste ST-Strecke in der 5-FU- bzw. 5-FU + Pro-Gruppe festgestellt (Tabelle 2).Das ST-Segment der 5-FU- und 5-FU + Pro-Gruppen war signifikant höher als das der Kontrollgruppe (p < 0,0001 bzw. p < 0,01).Auch die ST-Segmente der 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen waren signifikant geringer als die der 5-FU-Gruppe (p < 0,0001).Darüber hinaus war das ST-Segment in der 5-FU + Pro-Gruppe signifikant niedriger als in der 5-FU + CLC-Gruppe (p < 0,05) (Abb. 4).Es wurde beobachtet, dass die höchsten und niedrigsten QTc-Werte zu den 5-FU- bzw. 5-FU + CLC-Gruppen gehörten (Tabelle 2).Die QTc der 5-FU- und 5-FU + CLC-Gruppen waren signifikant höher bzw. niedriger als die der Kontrollgruppe (p < 0,0001).Auch die QTc der 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen waren signifikant niedriger als die der 5-FU-Gruppe (p < 0,0001).Darüber hinaus war die QTc in der 5-FU + Pro-Gruppe signifikant höher als in der 5-FU + CLC-Gruppe (p < 0,001) (Abb. 4).Die höchsten und niedrigsten WBC-Zahlen gehörten zu den 5-FU + Pro- bzw. 5-FU-Gruppen.WBC war in der 5-FU + Pro-Gruppe signifikant höher als in der 5-FU-Gruppe (p < 0,05) (Tabelle 3).Die höchsten und niedrigsten RBC-Zahlen wurden in der Kontroll- bzw. 5-FU-Gruppe beobachtet.Die Erythrozytenzahlen der 5-FU + Pro- und 5-FU-Gruppen waren signifikant niedriger als die der Kontrollgruppe (p < 0,01 und p < 0,001).Auch die RBC-Zahl der 5-FU + CLC-Gruppe war signifikant höher als die der 5-FU-Gruppe (p < 0,05) (Tabelle 3).Die höchsten und niedrigsten Hb-Spiegel wurden in der Kontroll- bzw. 5-FU-Gruppe beobachtet.Die Hb-Werte der 5-FU + CLC-, 5-FU + Pro- und 5-FU-Gruppen waren signifikant niedriger als die der Kontrollgruppe (p < 0,05, p < 0,05 bzw. p < 0,01) (Tabelle 3).Die höchsten und niedrigsten Plt-Zahlen wurden in den 5-FU + Pro- bzw. 5-FU-Gruppen beobachtet.Die Plt-Zahlen der Kontroll- und 5-FU-Gruppen waren signifikant niedriger als die der 5-FU + Pro-Gruppe (p < 0,001) (Tabelle 3).Das höchste und niedrigste AST/ALT-Verhältnis wurde in der 5-FU- bzw. Kontrollgruppe beobachtet (Fig. 5).Dieses Verhältnis war in den 5-FU- und 5-FU + Pro-Gruppen signifikant höher als in den Kontrollgruppen (p < 0,0001 bzw. p < 0,01).Dieser Unterschied wurde auch beim Vergleich der 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen mit der 5-FU-Gruppe beobachtet (p < 0,05 bzw. p < 0,001).Ein signifikanter Unterschied wurde auch zwischen den Behandlungsgruppen beobachtet (Tabelle 3).Wirkung der Verabreichung von 5-Fluoruracil und Propolis auf das AST/ALT-Verhältnis von Ratten.Die Werte werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.**, *** und **** zeigen jeweils p < 0,01, p < 0,001 und p < 0,0001 an.Die höchsten und niedrigsten LDH-Spiegel wurden in den 5-FU + Pro- bzw. 5-FU + CLC-Gruppen beobachtet.Keine der Gruppen hatte einen signifikanten Unterschied (Tabelle 3).Die höchsten und niedrigsten CK-MB-Spiegel wurden in den 5-FU + Pro- bzw. 5-FU + CLC-Gruppen beobachtet.Keine der Gruppen hatte einen signifikanten Unterschied (Tabelle 3).In der TAC-Analyse wurden die höchsten und niedrigsten Konzentrationen an Antioxidantien in der Kontroll- bzw. 5-FU-Gruppe gemessen, wobei die Kontrollgruppe signifikant höher war als die 5-FU-Gruppe (p < 0,0001).Das TAC-Niveau in der 5-FU + CLC-Gruppe war etwas niedriger als das der 5-FU + Pro-Gruppe.Auch war das TAC-Niveau in den 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen signifikant höher als in der 5-FU-Gruppe (p < 0,0001) ( 6A ).Wirkung der Verabreichung von 5-Fluouracil und Propolis auf den (A) TAC-, (B) MDA- und (C) CAT-Status der Serumproben.Die Werte werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.*, **, *** und **** zeigen jeweils p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 und p < 0,0001 an.Im CAT-Aktivitätsassay wurden die höchsten und niedrigsten Niveaus der CAT-Aktivität in der Kontroll- bzw. 5-FU-Gruppe gemessen, wobei die Kontrollgruppe signifikant höher war als die 5-FU-Gruppe (p < 0,001).Die CAT-Aktivität war in den 5-FU + CLC- und 5-FU + Pro-Gruppen nahezu gleich und signifikant niedriger als in der 5-FU-Gruppe (p < 0,01) ( 6B ).Im MDA-Assay wurden die höchsten und niedrigsten Oxidationsmittelkonzentrationen in der 5-FU- bzw. Kontrollgruppe gemessen, wobei die 5-FU-Gruppe signifikant höher war als die Kontrollgruppe (p < 0,01).Außerdem war der MDA-Spiegel in der 5-FU + CLC-Gruppe signifikant niedriger als 5-FU (p < 0,05).Darüber hinaus war der MDA-Spiegel in der 5-FU + Pro-Gruppe etwas höher als in der 5-FU + CLC-Gruppe ( 6C ).In der an Herzgewebeproben durchgeführten Studie wurde die höchste und niedrigste Nekrose in der 5-FU- bzw. der Kontrollgruppe beobachtet.Die 5-FU + CLC-, 5-FU + Pro- und 5-FU-Gruppen waren signifikant nekrotischer als die Kontrollgruppe (p < 0,01, p < 0,01 bzw. p < 0,001) (Tabelle 4) (Abb. 7).Wirkung der Verabreichung von 5-Fluorouracil und Propolis auf die histopathologischen Veränderungen von Herzgewebeproben.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.Normale Bedingungen in der Kontrollgruppe.Beachten Sie Hyperämie (Pfeile nach rechts), Nekrose (Pfeile nach unten) und Hyalinisierung (Pfeile nach links) in den 5-FU-, 5-FU + Pro- und 5-FU + CLC-Gruppen.Färbung mit Hämatoxylin und Eosin (H&E).100-fache Vergrößerung.Die höchsten und niedrigsten Hyperämieraten wurden in der 5-FU- bzw. der Kontrollgruppe beobachtet.Die 5-FU + Pro-, 5-FU + CLC- und 5-FU-Gruppen waren signifikant stärker hyperämisch als die Kontrollgruppe (p < 0,01, p < 0,0001 bzw. p < 0,0001).Auch die Hyperämie in den 5-FU- und 5-FU + CLC-Gruppen war signifikant höher als in der 5-FU + Pro-Gruppe (p < 0,01) (Tabelle 4) ( 7 ).Die höchste und niedrigste Hyalinisierung wurde in der 5-FU- bzw. der Kontrollgruppe beobachtet.Die 5-FU + CLC-, 5-FU + Pro- und 5-FU-Gruppen waren signifikant stärker hyalinisiert als die Kontrollgruppe (p < 0,01) (Tabelle 4) ( 7 ).Die niedrigsten und höchsten Niveaus der TNF-α-Expression wurden in der Kontroll- bzw. 5-FU-Gruppe beobachtet.Die TNF-α-Expression war in keiner Gruppe signifikant unterschiedlich.Auch war die TNF-α-Expression in der 5-FU + CLC-Gruppe höher als in der 5-FU + Pro-Gruppe ( 8A ).Wirkung der Verabreichung von 5-Fluorouracil und Propolis auf die Expression von (A) TNF-α und (B) COX-2.Die Werte werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt.Gruppen: Kontrolle, normale Kochsalzlösung;5-FU, 5-FU 125 mg/kg;5-FU + Pro, 5-FU 125 mg/kg + ethanolischer Propolis-Extrakt 250 mg/kg/d;5-FU + CLC, 5-FU 125 mg/kg + Colchicin 5 mg/kg/d.** zeigen p < 0,01 an.Die höchste COX-2-Expression wurde in der 5-FU-Gruppe und die niedrigste in der Kontrollgruppe beobachtet.Seine Expression war in der Kontrollgruppe signifikant geringer als in der 5-FU-Gruppe (p < 0,01).Die COX-2-Expression ist in der 5-FU + CLC-Gruppe höher als in der 5-FU + Pro-Gruppe ( 8B ).Med.Pharmacol.Klin.Ann.Int.Pharmacol.Erw.Zelle.Med.Erw.Pharmacol.Med.Klin.Med.Klin.Wissenschaft.Int.Int.Wissenschaft.Nutr.Dis.Int.Med.Wissenschaft.Dis.Kommun.Wissenschaft.Med.Med.Wissenschaft.Int.Med.Leider ist für diesen Artikel derzeit kein teilbarer Link verfügbar.